恩施腺病毒载体系统 友名生物

农bacillus转化法

　　农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根癌农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根癌农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中，80%左右是由根癌农bacillus介导的，大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根癌农杆1菌介导的转化。

　　根癌农bacillusTi质粒上有一段转移DNA（T-DNA）和Vir区，腺病毒载体系统，在农bacillus侵染植物时，这段T-DNA可以插入到植物基因组中，使其携带的基因在植物中得以表达。Vir区共24个基因，它们表达的蛋白与T-DNA的加工和转移有关。

第yi代腺病毒载体：一般将E1或E3基因缺失的腺病毒载体称为第yi代腺病毒载体，此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应，纯化后可以安全使用，体内表达周期可达4周。

第二代腺病毒载体：E2A或E4基因缺失的腺病毒载体被称为第二代腺病毒载体，产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进，但病毒包装难度和出毒和病毒滴度下降厉害，应用相当局限。

第三代腺病毒载体：第三代载体缺失了全部的（无病毒载体，gutless vector）或大部分腺病毒基因（微型腺病毒载体，mini Ad），仅可保留ITR和包装信号序列。第三代腺病毒载体zui大可插入35kb的基因，病毒蛋白表达引起的细胞免1疫反应进一步减少，载体中引入核基质附着区基因可使得外源基因保持长期表达，并增加了载体的稳定性。这一载体系统需要一个腺病毒突变体作为辅助病毒。

　　植物的遗传转化是以植物器1官、组织、细胞或原生质体作为受体，通过某种技术或途径转入外源基因，获得外源基因稳定表达的可育植株。遗传转化可以打破物种界限，有目的地实现物种之间或物种内部遗传物质的交流，为植物的遗传改良开辟了一条新的途径。

　　植物遗传转化方法就是通过特定的方式将外源基因导入到受体细胞内，使之发生定向的遗传变异。目前，已经建立了多种转化系统。对于大多数遗传转化系统而言，遗传转化方法是遗传转化系统的关键环节，决定着转化的成败及效率。用于植物的遗传转化方法有许多：农杆1菌介导法、基因枪法和PEG法等。

　　在转基因植物中，用农杆1菌介导法获得的转基因植物占80%，但大多集中在双子叶植物上。自从基因枪问世以后，单子叶植物中的禾谷类作物的遗传转化获得了迅速发展。农杆1菌介导法和基因枪法已成为目前用于遗传转化的主要方法。