自2008年开始,小鼠和人的ips细胞研究取得了极大的发展,并在体细胞的选择、转录因子的组合和数量、病毒载体、筛选条件和小分子化合物等方面进行了完善,还逐步向疾病的cure方面深入,镰刀形红细胞贫1血症cure的研究,从理论和实践上为人类单基因遗传病的cure奠定基础。此外,猴、大鼠和猪ips细胞的建立在人类疾病研究上具有重大应用价值,既可构建人类疾病的动物模型,又能进行细胞移植实验,为将来的实验细胞替代cure奠定基础。
细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养也叫细胞克1隆技术,人iPS细胞相关,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克1隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程,细胞培养本身就是细胞的大规模克1隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或很少分化的多细胞,这是克1隆技术必不可少的环节,而且细胞培养本身就是细胞的克1隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术,通过细胞培养既可以获得大量细胞,又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。
细胞传代
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
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