友名生物技术 RNA提取

细胞增殖是生活1细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。

越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测，关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。那么到目前为止，研究细胞增殖有哪些手段呢？

细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿1瘤medicine效果的基础实验手段。准确的检测细胞增殖方法是BrdU法。而EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。EdU试剂盒是一种嘧1啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗1体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法。

如何评价和选择支原体检测试剂盒

1. 灵敏度。

灵敏度常用支原体基因组的拷贝数或支原体菌株的CFU表示。

2. 特异性和广谱性。

质量好的试剂盒应检测的支原体物种越多越多，并且特异性强，即只针对支原体，不针对其他细菌等微生物，没有交叉反应。

3. 稳定性。

冻干粉比液体试剂的稳定性高。

4. 样本类型及样本处理。

一款好的试剂盒，会标出它适合的样本类型，也会说明如何处理样本。要注意有的样本含有抑制PCR反应的物质，因此需要处理。

5. 对照品。

一个好的试剂盒，会带有阳性对照和内控对照。内控对照是用于监测PCR是否正常。如果样本含有抑制PCR的物质，则内控对照的条带会发生缺失。有严重支原体污染的样本由于样本中的支原体对内控对照产生了竞争性抑制，因此支原体条带越强，内控条带越弱

PCR方法已广泛用于科研，在工业中也有不断扩大应用的趋势，它包括检测一些病原体、检测支原体污染、检测细菌污染以及检测残留宿主DNA等。

PCR在工业中的应用主要存在一个方法验证的问题，尤其是灵敏度的验证。灵敏度不够，就会发生漏检。另外，PCR所直接面对的样本是DNA，RNA提取，而非病原菌或DNA，因此还需要做DNA抽提，这也是要注意的。

因此，如能采用PCR检测支原体并替代药典方法，还是能节省很多时间和精力。但PCR方法的验证需要较为完整。灵敏度验证是一个重要方面。灵敏度不够，就会发生漏检。《欧洲药典》第2.6.7章（EP 2.6.7）和《日本药典》第十七版第G3章（JP G3），都规定，对于核酸扩增法（如PCR）检测支原体，如替代传统的培养法，都要求检测限达到10 CFU/ml。

具体验证可使用10CFU的支原体灵敏度标准品，它一般为冻干粉形式，需要用待测样本的样本基质（需保证里面不含支原体）来复溶，再进行DNA抽提以及PCR检测。如检测的电泳有条带，或者qPCR检测后的Ct值小于40，即表明检测成功。