动物细胞培养
高速冷冻离心机在所有的细胞离体培养中,困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血1清:动物细胞离体培养常常需要血1清。相对常用的是小牛血1清。血1清提供生长必需因子,如激1素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里,血1清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃,塑料等作为支持物。
⑶气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件。
微生物细胞培养
微生物多为单细胞生物,生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂,因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度,而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻,玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物天然培养基。对于一些特殊微生物的营养条件要求,可以在这些天然培养基的基础上额外添加。
营养条件
1.培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质,包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求,有多种合成培养基可供选择,如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。
2.其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外,还需根据不同细胞和不同的培养目的添加其他成分,细胞增殖检测试剂盒,如血1清、因子等。
血1清提供的是细胞外基质、生长因子和转铁蛋白等重要物质,常用的是胎牛血1清。要根据不同的细胞和不同的研究目的决定添加血1清的比例。10%~20%的血1清能维持细胞较快的生长增殖速度,称为生长培养液;为维持细胞缓慢生长或不死,添加2%~5%的血1清即可,称为维持培养液。但血1清中也存在有害于细胞生长和繁殖的物质,如补体、免1疫球蛋白和一些生长抑制因子;成分不明确,影响对结果的分析;不同动物、不同批次的血1清活性差别较大,影响培养效果的稳定性。
谷氨酰胺是细胞生长重要的氮源,在细胞生长代谢过程中起重要作用,但由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解,4℃下放置7天即可分解约50%,故谷氨酰胺需在使用前添加。
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