细胞的鉴定
1. u表面标志分子鉴定iPS细胞能够表达多能iPS细胞特异的表面标志分子,如:ssea-1(阶段特异性胚胎抗原1),ssea-3等。这些物质在已分化体细胞表面不表达,从而鉴定。
2. u表观遗传状态鉴定iPS细胞与ES细胞具有相似的DNA甲1基化模式和组蛋白修饰情况。iPS细胞中的多能基因,如oct-4,Nanong等的启动子区域CpG岛从高甲1基化转变为类似ES细胞的低甲1基化状态。
3.u基因表达模式和发育潜能鉴定d. uES和iPS细胞基因表达谱基本相同。iPS细胞具有发育为三个胚层的能力,并能参与生殖系的发育,这与ES细胞相同。iPS细胞的多能基因启动子区域具有与ES细胞相同的高的H3K4Me3及低H3K27Me3水平。
植物细胞培养
⑴光照:离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格,因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关,而且与细胞分化有关,例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用,人iPS细胞相关,所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中,光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质,如medicine的过程,植物细胞大多是在反应器中悬浮培养。
⑵激1素:植物细胞的分裂和生长特别需要植物激1素的调节,促进生长的生长素和促进细胞分裂的分裂素是基本的激1素。植物细胞的分裂,生长,分化和个体生长周期都有相应的激1素参与调节。和动物细胞相比,植物细胞离体培养对激1素要求的原理已经了解,其应用技术也已相当成熟,已经有一套能使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激1素、渗透压、酸碱度、微量元素等的需求。
细胞传代
细胞密度达到80%~90%时.去培养基,10ml PBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA的胰蛋白酶,放人细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化,转移至15ml离心管。
加入10ml PBS清洗细胞培养盘,转移至15ml离心管,2000rpmX2min,弃上清液。再加入10ml PBS(经高压灭菌,保存于40C),吹匀,吸取10微升进行计数,按照1×106/盘接种,在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。
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